کلونینگ آنزیم فیتاز پنیوفورا لایسی حاوی برچسب‌ هیستیدین در مخمر

سابقه و هدف: فیتیک‌اسید، یکی از ترکیبات معدنی بسیار مهمی است که در درون گیاهان ذخیره‌ می‌شود. فیتاز ( E.C. 3.1.3.8 یا E.C. 3.1.3.26 ) به صورت گسترده‌ای به عنوان یک افزودنی جهت افزایش جذب فسفر و سایر عناصر در حیوانات تک‌معده‌ای به غذای آنها اضافه شده و بدین ترتیب سبب کاهش دفع فسفات به داخل محیط می‌گردد. در این تحقیق، کلونینگ و افزودن برچسب شش آمینواسیدی هیستیدین به ژن نوترکیب فیتاز در باکتری اشرشیا‌کلی و سپس مخمر، به منظور خالص‌سازی آنزیم تولید شده در مقادیر بالا در این میزبان، انجام شد. مواد و روش‌ها: توالی پروتئینی آنزیم فیتاز قارچ P. lycii از بانک های اطلاعاتی پروتئین استخراج شده و با توجه به ترجیح کدنی مخمر ، توالی ژن طراحی و سنتز گردید. با طراحی پرایمرهای مناسب توالی حاوی شش هیستیدین به ژن مورد نظر داخل حامل دوگانه­ی pFPMTMF 14α'> اضافه شده و در نهایت با استفاده از الکتروپوریشن به داخل مخمر انتقال یافت. یافته‌ها: سازه‌ی نوترکیب حاوی ژن فیتاز به همراه برچسب شش آمینواسیدی هیستیدین تولید شد. حضور ژن در داخل باکتری و مخمر با استفاده از روش‌های هضم آنزیمی و PCR تایید گردید. نتیجه­گیری: کلونینگ موفق ژن فیتاز قارچی حاوی برچسب شش هیستیدین، در باکتری اشرشیاکلی و مخمر به منظور بیان بالا و سپس خالص سازی این آنزیم، انجام شد.